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影响到荧光显微镜成像效果的因素
点击次数:105 发布时间:2019-06-20
     影响到荧光显微镜成像效果的因素
    影响荧光显微镜成像的荧光因素很多,主要包括:荧光样品的制备,荧光光源的选择,滤片转盘的设计,荧光滤片的组合策略(激发光滤片,发射光滤片,双色镜分光滤片,带宽选择),显微镜物镜种类,显微镜摄像系统的选择等问题。荧光的激发、滤光、成像、淬灭,荧光实验的调整就是怎么才能协调好以上因素得到最好的效果,其中影响到成像效果的一个重要因素即是荧光光源。
    荧光显微镜的常用光源通常都是白光光源:高压汞灯,氙灯,金属卤素灯和led白光光源以及高端的led单波长光源。
    1、汞灯
    超高压汞灯(50-200w),它是用石英玻璃制作,中间呈球形,内充一定数量的汞,工作时由两个电极间放电,引起汞蒸发,球内气压迅速升高,当汞完全蒸发时,可达50~70个标准大气压力,这一过程一般约需5~15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使汞分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光,足以激发各类荧光物质,因此,为荧光显微镜普遍采用。推荐产品:欧司朗50w,103w,200w汞灯,适用于各大厂家高端荧光显微镜;一般200小时寿命
    2、氙灯
    氙灯和汞灯做为白光源,都能提供从紫外到近红外一系列波长的光,但它们却有着不同的激发光谱。汞灯集中在近紫外、蓝光以及绿光附近,这种在峰值的高激发能量确保产生明亮的荧光信号,但光毒性却很强。因此,hbo用来对固定样品或弱荧光成像。相比而言,氙灯光源的激发比较平缓,可以用于不同波长间强度的比较,例如用于钙离子浓度测量等。氙灯的强激发在近红外800-1000nm。
    3、金属卤素灯
    目前各大显微镜品牌广泛使用的一种光源,它和汞灯的激发光谱很像,但它和显微镜以光纤相连,能散热,寿命更长。光纤从光源连到显微镜上,可以大量减少光产生的热能。金属卤素灯对活细胞成像的另一个优势是内置强度设计装置,可以容易调节激发光。也可以通过选择直接连接获得更好的激发效果。
    4、led白光荧光光源:这种光源的开关在毫秒间,减少样品在光照下的暴露时间,延长寿命。另外,led光的衰减即快又精确,长期活细胞试验下可大大减少光毒性。和白光相比,led仅仅在一个较窄的光谱激发,多个led波段使得led光源能为多色荧光提供应用。
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