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荧光显微镜中滤光片的应用
点击次数:31 发布时间:2019-12-05
   显微镜的放大率和分辨率之间的区别
  了解荧光成像时要获得良好结果时,了解放大倍率和分辨率之间的区别非常重要。当谈论放大倍数时,我们指的是在显微镜下观察物体时会出现多大的物体。相反,当我们从实际意义上谈论分辨率时,我们指的是我们可以在图像中区分多少细节,这可能是主观的。从技术上讲,分辨率受光的折射特性限制。
  使用荧光可以提高分辨率
  分辨率和放大率不一样。在显微镜下,我们将放大图像中可见的细节称为分辨率。如果您看不到放大后的样本中的细节,则放大或使某些内容看起来变大不会有什么好处。明视野显微镜依赖于由于样品各个部分之间的密度差异而导致的光吸收差异,就我们的目的而言,这就是细胞。因此,当您想在细胞中看到许多细节时,明场显微镜并不是很好。您如何提高分辨率?加入荧光团以染色样品中的结构,并过滤以照亮样品,聚焦样品发出的光,添加灵敏的检测器,现在您可以进行荧光显微镜检查了。
  荧光成像使用的滤光片的不同类型
  通常情况下,滤光片组被设计成可用于捕获指定荧光团的更大激发和发射波长,但不会捕获所有的荧光。多数现代化滤光片组的设计旨在确保激发滤光片只允许指定波长区间的光线通过。这种类型的滤光片称为带通滤光片(band-pass filter)。带通滤光片通常通过中间波长和区间宽度确定。在较为简单的荧光显微镜装置中,一旦激发光线离开激发滤光片,即会照射到靶标上,靶标上的荧光基团随即变为激发状态,然后发射向光谱的红外端(相对于激发光线)迁移的光线。并非所有此类发射光线都会被检测器捕获到——仅那些允许通过二向分色镜且能通过发射滤光片的光线。发射滤光片通常为带通滤光片或长通滤光片,具体取决于特定的荧光团和成像实验。如果您希望让超过特定波长的光线通过检测器,可选择长通滤光片.
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